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細說雞elisa檢測試劑盒的操作方法和注意事項

發布時間:2020-07-23   點擊次數:2011次
  雞elisa檢測試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被昆蟲捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  操作方法:
  1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。
  3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
  4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
  5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
 
  操作注意事項:
  1、雞elisa檢測試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用;
  2、實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存;
  3、濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,Zui終結果乘以5才是樣本實際濃度;
  4、嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作;
  5、所有液體組分使用前充分搖勻。
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